單克隆抗體制備的基本方法

　　抗體是機體在抗原刺激下產(chǎn)生的能與該抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。常規(guī)的抗體制備是通過動物免疫并采集抗血清的方法產(chǎn)生的，因而抗血清通常含有針對其他無關抗原的抗體和血清中其他蛋白質(zhì)成分。一般的抗原分子大多含有多個不同的抗原決定簇，所以常規(guī)抗體也是針對多個不同抗原決定簇抗體的混合物。即使是針對同一抗原決定簇的常規(guī)血清抗體，仍是由不同B細胞克隆產(chǎn)生的異質(zhì)的抗體組成。

 

　　單克隆抗體制備的基本方法：

　　對抗原的要求是純度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如為細胞抗原，可取1×107個細胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加*福氏佐劑并經(jīng)充分乳化，如為聚丙烯酰胺電泳純化的抗原，可將抗原所在的電泳條帶切下，研磨后直接用以動物免疫。

　　選擇與所用骨髓瘤細胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠齡在8~12周，雌雄不限。為避免小鼠反應而不佳或免疫過程中死亡，可同時免疫3~4只小鼠。

　　免疫過程和方法與多克隆抗血清制備基本相同，因動物、抗原形式、免疫途徑不同而異，以獲得抗體為目的。免疫間隔一般2~3周。一般被免疫動物的血清抗體效價越高，融合后細胞產(chǎn)生特異抗體的可能性越大，而且單克隆抗體的質(zhì)量（如抗體的濃度和親和力）也與免疫過程中小鼠血清抗體的效價和親和力密切相關。末次免疫后3~4天，分離脾細胞融合。

 

　　在體外培養(yǎng)條件下，細胞的生長依賴適當?shù)募毎芏龋蚨谂囵B(yǎng)融合細胞或細胞克隆化培養(yǎng)時，還需加入其他飼養(yǎng)細胞（feedercell）。常用的飼養(yǎng)細胞為小鼠的腹腔細胞，制備方法為用冷凍果糖液注入小鼠腹腔，輕揉腹部數(shù)次，吸出后的液體中即含小鼠腹腔細胞，其中在巨噬細胞和其他細胞。亦有用小鼠的脾細胞、大鼠或豚鼠的腹腔細胞作為飼養(yǎng)細胞的。在制備飼養(yǎng)細胞時，切忌針頭刺破動物的消化器官，否則所獲細胞會有嚴重污染。飼養(yǎng)細胞調(diào)至1×105/ml，提前一天或當天置板孔中培養(yǎng)。