淺析單抗制備的簡要過程

　　單抗制備是機(jī)體在抗原刺激下產(chǎn)生的能與該抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。常規(guī)的抗體制備是通過動物免疫并采集抗血清的方法產(chǎn)生的，因而抗血清通常含有針對其他無關(guān)抗原的抗體和血清中其他蛋白質(zhì)成分。一般的抗原分子大多含有多個不同的抗原決定簇，所以常規(guī)抗體也是針對多個不同抗原決定簇抗體的混合物。即使是針對同一抗原決定簇的常規(guī)血清抗體，仍是由不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的異質(zhì)的抗體組成。因而，常規(guī)血清抗體又稱多克隆抗體(polyclonalantibody)，簡稱多抗。

 

　　由于常規(guī)抗體的多克隆性質(zhì)，加之不同批次的抗體制劑質(zhì)量差異很大，使它在免疫化學(xué)試驗(yàn)等使用中帶來許多麻煩。因此，制備針對預(yù)定抗原的特異性均質(zhì)的且能保證供應(yīng)的抗體是免疫化學(xué)家長期夢寐以求的目標(biāo)。隨著雜交瘤技術(shù)的誕生，這一目標(biāo)得以實(shí)現(xiàn)。

 

　　單抗制備的簡要過程：

 

　　骨髓瘤細(xì)胞：一般不分泌抗體，能在體外無限繁殖和連續(xù)繼代培養(yǎng)，且為HPRT一(次鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶)或TK-(胸腺嘧啶核苷激酶)。多用BALB/C小鼠的骨髓瘤細(xì)胞。[小鼠骨髓瘤細(xì)胞能在體外無限增殖傳代并不分泌抗體。腫瘤細(xì)胞DNA生物合成有兩條途徑：一條由糖、氨基酸合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA，這是主要途徑。這條途徑可被葉酸的拮抗物一氨基喋呤(A)所阻斷(但如果培養(yǎng)基中含核苷酸“前體“次和胸腺嘧啶核苷，即便有A存在，細(xì)胞通過另一途徑(稱替代途徑或應(yīng)急途徑)也可合成核苷酸。但后一途徑需次鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)存在)。]

 

　　淋巴細(xì)胞：經(jīng)過免疫處理的淋巴細(xì)胞，多用大鼠或小鼠。

 

　　免疫方法：對細(xì)胞或微生物抗原可直接注射如小鼠體內(nèi)，可溶性蛋白抗原可與等量的福氏佐劑混合乳化后，注入到動物體內(nèi)。