蛋白表達(dá)純化有關(guān)天然蛋白質(zhì)的三個(gè)關(guān)鍵參數(shù)

　　與天然蛋白質(zhì)表達(dá)的三個(gè)關(guān)鍵參數(shù)：

　　1.IPTG濃度

　　有可能宿主中的蛋白表達(dá)將通過lac操縱子系統(tǒng)操作。這個(gè)系統(tǒng)的詳細(xì)解釋可以在別處找到，加入異丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG），一種乳糖類似物，控制蛋白的表達(dá)。蛋白的表達(dá)應(yīng)處于生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期，即當(dāng)溶液的波長(zhǎng)600（OD 600）處的光密度達(dá)到0.4-0.6。如果目標(biāo)是可溶性蛋白質(zhì)，不要改變細(xì)胞中蛋白的折疊功能。已經(jīng)假定不溶性蛋白可能是由于分子伴侶的存在。因此，使用高濃度的IPTG（＞1mM）可能不總是產(chǎn)生好的結(jié)果。嘗試幾個(gè)不同的濃度，看看哪一個(gè)給高的可溶性蛋白的產(chǎn)量。

　　2.溫度

　　偶爾可以在37℃的典型溫度下，通過生長(zhǎng)和誘導(dǎo)分離可溶性形式的蛋白質(zhì)，但通常情況下，溶解度在較低溫度下增強(qiáng)。可嘗試在30℃，25℃和18℃下進(jìn)行誘導(dǎo)。

　　注意：如果首先在37℃生長(zhǎng)，先讓培養(yǎng)物冷卻到誘導(dǎo)溫度，再加入IPTG。

　　3.誘導(dǎo)時(shí)間

　　更長(zhǎng)并不總是更好。對(duì)于對(duì)宿主有毒的蛋白尤其如此。在誘導(dǎo)期間，每隔幾個(gè)小時(shí)取樣，并檢查目的蛋白的表達(dá)。典型的誘導(dǎo)時(shí)間根據(jù)溫度而變化，對(duì)于37℃，嘗試4小時(shí);對(duì)于30℃，進(jìn)行5-6小時(shí)，并且任何低于25℃的溫度應(yīng)該允許生長(zhǎng)過夜。