細胞融合是單克隆抗體制備中的關鍵步驟

　　單克隆抗體(簡稱單抗)是指由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。相較于常規抗體，單抗因其特異性高、純度高、反應性強等特點，在醫學診斷、治療及基礎研究中具有較高的應用價值。
 

　　1.動物免疫：為了制備單抗，先需要對動物(通常為小鼠)進行免疫，使動物體內的B細胞能夠產生針對特定抗原的抗體。此過程涉及選擇合適的抗原并進行多次免疫以增強免疫響應。
 

　　2.細胞融合：細胞融合是單抗制備中的關鍵步驟，其目的是將已經致敏的B細胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞融合，形成雜交瘤細胞。這一過程通過化學或電激等方法實現，使兩種細胞膜融合，從而獲得既能產生特異性抗體又能無限增殖的雜交瘤細胞。
 

　　3.選擇性培養：融合后的細胞需在特定的選擇性培養基(如HT培養基)中培養，該培養基含有抑制未融合的骨髓瘤細胞生長的成分(如次黃嘌呤、胸苷)，只有真正的雜交瘤細胞才能在此培養基中存活并增殖。
 

　　4.雜交瘤篩選：通過ELISA等方法對雜交瘤細胞的培養上清液進行篩選，找出能夠分泌特定抗體的陽性雜交瘤細胞。這一步是確保獲得目標單抗的關鍵環節。
 

　　5.雜交瘤擴增與抗體生產：將篩選出的陽性雜交瘤細胞進行擴增培養，然后通過體外培養或體內誘生腹水的方式大規模生產單抗。對于抗體的收集與純化，可以采用蛋白A/G柱等親和層析技術來實現高效純化。
 

　　6.抗體鑒定與應用：獲得的單抗需要進一步鑒定其特異性、親和力等生物學特性，這通常通過流式細胞術、西方印跡等方法完成。確定單抗的性質后，便可將其應用于疾病的診斷、治療或其他科學研究中。
 

　　總的來說，單克隆抗體是一個復雜但較具系統性的過程，涵蓋了從動物免疫到抗體生產的多個關鍵步驟。每一步驟都至關重要，并可能影響獲得的單抗的質量和應用效果。因此，在進行單抗制備時，需嚴格控制實驗條件，合理設計實驗方案，以確保獲得高質量、高特異性的。