免疫共沉淀

免疫共沉淀(Co-lmmunoprecipitation) 是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相
互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。

 其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被
保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。目前多用
精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，beads. 上的
prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于
確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
基本流程是:細胞裂解液中加入抗體，與抗原形成特異免疫復(fù)合物，經(jīng)過洗脫，收集免疫復(fù)合物，然
后進行SDS-PAGE及Western blotting分析。

 服務(wù)流程:
1.構(gòu)建含有目的基因的表達質(zhì)粒
2.共轉(zhuǎn)細胞
3.裂解細胞并加入誘餌蛋白的抗體,孵育
4.加入protein A或G以與抗體特異性結(jié)合于Agarose珠
5. SDS-PAGE; Western Blot