蛋白定量有哪些方法？

蛋白定量的方法有很多種，應用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標準品，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時間的反應（BCA法反應為37℃、20-30min，Bradford法反應一般為37℃，5min），酶標儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標準曲線，依據(jù)標準曲線計算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法筆者均有使用經(jīng)驗，相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應時間，也無需配置反應試劑，...

做實驗不會制備細胞爬片怎么行?

我們在做免疫熒光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測（TUNEL）時，免不了要制備細胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實驗數(shù)據(jù)的精準性。今天，就教大家如何制備好的細胞爬片。一.實驗材料及試劑蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等；75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基（RPMI-1640*培養(yǎng)基）、胰酶等。二、實驗內(nèi)容爬片準備：1、24*24蓋玻片，剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片，放在大的培養(yǎng)皿中爬片。2.蓋玻片泡酸過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸...

安諾倫銷售Agrisera品牌產(chǎn)品——植物抗體ling航者

Agrisera公司成立于1980年，位于瑞典，長期以來，公司致力于植物/環(huán)境科學研究中所需蛋白抗體研發(fā)與銷售，以專注于研發(fā)高品質(zhì)稀有單克隆及多克隆抗體而在業(yè)界有較高知ming度。其抗體主要涉及植物蛋白，Agrisera公司提供1000種用于植物和藻類細胞生物學研究的一抗，2000多種二抗。Agrisera公司提供的抗體分兩大類：植物及藻類的抗體，以及細菌、真菌、昆蟲、魚等動物類抗體。針對植物蛋白質(zhì)的保守氨基酸序列，Agirsera還du家開發(fā)了數(shù)十種通用抗體（globala...

快速抗體制備服務

抗體的產(chǎn)生，是圍繞B淋巴細胞的激活與分化為漿細胞進行的。在shou次免疫過程中，抗原首先經(jīng)多種兔疫相關淋巴或巨噬細胞吞噬充分暴露抗原,并將抗原呈遞給靜止B淋巴細胞，以使其活化，活化后的B淋巴細胞轉化為漿細胞，也就是抗體的產(chǎn)生者。由于抗原的表面存在多種抗原識別決定簇，因此在經(jīng)過免疫相關細胞加工后，呈遞給B淋巴細胞的抗原決定簇也是多種多樣的，理論上，一個B淋巴細胞只接受-種抗原決定簇，產(chǎn)生-種對應與之結合的抗體，多個B淋巴細胞就會產(chǎn)生多種識別抗原不同抗原決定簇(也就是表位)的抗體...

質(zhì)粒DNA提取實驗

在我們的細胞實驗中經(jīng)常會用到質(zhì)粒DNA，那么具體是怎么來的呢？今天講的是DNA的提取步驟。前提：細菌繁殖步驟（挑單克隆，置于LB培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫搖床搖過夜，180-200rpm）。一般市面上有很多試劑盒可供大家使用，大體步驟都差不多的啦~~我按照我所使用的試劑盒（AxyPrep中抽試劑盒）的步驟分享如下：收集1.50ml離心管收集過夜搖菌的LB培養(yǎng)液（此時可以做一下判斷，如果液體未變渾濁，說明細菌并未繁殖成功，這樣肯定難以提出DNA；如果液體渾濁，便說明細菌繁殖成功啦...

常見問題之蛋白在真核細胞的表達量低？

實際上真核生物的蛋白也可以用真核細胞蛋白表達系統(tǒng)來實現(xiàn)，而且效果往往更好。用原核生物來表達主要還是因為操作簡單，快速。如果希望表達和純化的蛋白性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)原核系統(tǒng)表達之后仍然有正確的折疊構象，那么使用原核表達系統(tǒng)就很合適了。有的時候在不同的表達體系里面對蛋白的表達量是有影響的。當構建完成后攜帶有信號肽的時候，一些蛋白在真核表達體系中表達量極低。去除信號肽序列值后，直接表達成熟肽，表達水平明顯提高。所以說構建的真核表達載體高表達mRNA卻檢測不到目的蛋白是*有可能的。

常見問題之影響蛋白表達因素有哪些？

1.蛋白本身的特性：蛋白分子量大小、蛋白來源/物種、是否為毒性蛋白，蛋白翻譯后修飾程度、蛋白自身結構的復雜程度2.宿主的選擇：宿主本身的特性、蛋白表達需求等都影響著蛋白表達3.蛋白需求量：蛋白應用范圍對應的需求量不同，所以要根據(jù)需求量確定表達系統(tǒng)4.質(zhì)粒載體的選擇：載體是攜帶外源基因的工具，要根據(jù)系統(tǒng)選擇合適的載體才能使蛋白更好的表達5.融合標簽的選擇：蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用：一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易；另一方面是為了促進某些不溶性蛋...

常見問題之HIS標簽蛋白沒有被洗脫下來

蛋白掛柱后洗脫不下來主要是因為蛋白和柱子結合能力太強或者洗脫條件太溫和，我們可以從以下幾方面考慮解決問題。1、洗脫條件太溫和：重新摸索洗脫條件，增加緩沖液中咪唑濃度或者適當降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分（換成tris-HCl緩沖液）。2、蛋白在柱子中沉淀：適當降低上樣量或蛋白濃度，用咪唑線性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度，或者在變性的條件下洗脫（加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍）。3、非特異性的疏水或者其他作用：在洗脫液中加非離子的添加劑...