單抗制備為什么免疫后沒有效價或免疫后效價低？

　　單抗制備會由于亞克隆細胞生長環境不合適，導致融合細胞染色體丟失，分泌特性改變，親和力從高變低，這時就需要及時更換培養液，當細胞增長到一定密度的時候，培養基就開始變顏色，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失；控制好細胞的密度，密度過大使新加入的培養基不至于很快被消耗，影響融合細胞的生長，造成染色體丟失；不要過于頻繁操作細胞，當細胞生長密度不是很大的時候，不要頻繁操作，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化。

 

　　單抗制備為什么免疫后沒有效價或免疫后效價低？

　　（1）設計的抗原與被免疫的動物內源蛋白有同源性或者抗原是免疫原性極差的小分子物質。對于前一種情況應該重新設計抗原，設計抗原時盡量選取目標蛋白特異性的序列，可以設計為短肽然后再與載體蛋白偶聯之后免疫；對于后一種情況，首先確認小分子物質是否已經正確地和載體蛋白偶聯，如果偶聯沒有問題，可以更換其它的載體蛋白，一般來說KLH是所有載體中較為優先考慮的蛋白。

　　（2）免疫的周期不正確。免疫周期過長或過短，各免疫步驟之間的間隔過長或過短都有可能影響免疫效果，詳細請參考本站有關動物免疫的部份，實際操作中的相關程序與本站推薦的程序相差盡里不超過50%的偏差。

　　（3）免疫佐劑不合適。在免疫時，對于某些抗原可能效果不佳，弗低佐劑也不能保證*有效，此時可以考慮更換佐劑嘗試。

　　（4）免疫劑量不合理。過大的免疫劑量可能導致免疫耐受，過少的免疫劑量可能無法激活免疫應答。一般來說，實際免疫劑量與本站所推薦的劑量不要相差兩倍以上。

　　（5）免疫途徑不合理。對于有些免疫原性弱的抗原，可以考慮脾內免疫方法，具體操作本站上也有詳細的講解。

　　（6）測效價的過程存在錯誤操作，尤其考慮包被是否成功或二抗使用是否正確。同時，一抗（即血清）稀釋梯度盡量放寬，一般建議從1：500或1：1000開始作梯度稀釋。對于小分子物質，效價達到1：2000仍可視為免疫成功。