噬菌體篩選的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)介紹

　　將編碼多肽的外源DNA片段與噬菌體表面蛋白的編碼基因融合(插入信號(hào)肽與衣殼蛋白基因間)后，以融合蛋白的形式呈現(xiàn)在噬菌體的表面，每個(gè)噬菌體只含1個(gè)外源基因，被展示的多肽或蛋白可保持相對(duì)的空間結(jié)構(gòu)和生物活性，展示在噬菌體的表面。導(dǎo)入了各種各樣外源基因的一群噬菌體，就構(gòu)成一個(gè)展示各種各樣外源肽的噬菌體展示庫(kù)。
 

　　噬菌體篩選展示局限性：
 

　　1、肽庫(kù)容量受大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率影響，容量一般在109，高于此限制的較多基因?qū)㈦y以表達(dá)；
 

　　2、編碼多肽的基因帶有一定的密碼子偏愛(ài)性，限制了肽庫(kù)的復(fù)雜度；
 

　　3、噬菌體宿主大腸桿菌的生物合成系統(tǒng)有自身的限制因素，如缺乏氨基酸修飾、蛋白糖基化、不能合成D型氨基酸。
 

　　4、在噬菌體展示過(guò)程中必須經(jīng)過(guò)細(xì)菌轉(zhuǎn)化、噬菌體包裝，有的展示系統(tǒng)還要經(jīng)過(guò)跨膜分泌過(guò)程，這就限制了所建庫(kù)的分子多樣性。
 

　　5、不是所有的序列都能在噬菌體中獲得很好的表達(dá)，因?yàn)橛行┑鞍踪|(zhì)功能的實(shí)現(xiàn)需要折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、膜插入和絡(luò)合，導(dǎo)致在體內(nèi)篩選時(shí)需外加選擇壓力。
 

　　噬菌體篩選從HBx(肝癌相關(guān)抗原)單抗細(xì)胞中克隆重鏈可變區(qū)基因，重組入M13噬菌體，驗(yàn)證表達(dá)產(chǎn)物具有活性，然后表達(dá)出單鏈抗體、單域抗體或嵌合抗體，為肝癌導(dǎo)向治療研究提供基礎(chǔ)。為解決非典型嗜血流感桿菌毒力因子表面蛋白混合寡糖LOS制備疫苗遇到的免疫原型弱的問(wèn)題，用兔抗LOS篩選肽庫(kù)，得到4個(gè)一致性序列，其中3個(gè)與兔抗親和力高。用篩選得到的3個(gè)高親和力肽免疫兔得到的抗體對(duì)染病小鼠模型具有抗體保護(hù)性作用。