多抗制備基于機體免疫系統(tǒng)對抗原的識別和免疫應(yīng)答過程

　　多克隆抗體(polyclonal antibody，多抗)是由多種不同的 B 細(xì)胞克隆針對抗原物質(zhì)產(chǎn)生的多樣化抗體混合物。多抗制備主要基于機體免疫系統(tǒng)對抗原的識別和免疫應(yīng)答過程。
 

　　當(dāng)將抗原物質(zhì)注入動物體(如小鼠、大鼠、兔子等)后，動物的免疫系統(tǒng)會被激活。抗原呈遞細(xì)胞(如樹突狀細(xì)胞)會攝取、加工抗原，并將其呈遞給輔助性 T 細(xì)胞。輔助性 T 細(xì)胞被激活后，會釋放細(xì)胞因子，刺激 B 細(xì)胞的增殖和分化。B 細(xì)胞表面的 B 細(xì)胞受體能夠特異性地識別抗原的不同表位。每一個 B 細(xì)胞克隆只能識別抗原上的一種特定表位，在抗原的刺激以及輔助性 T 細(xì)胞的輔助下，這些 B 細(xì)胞會大量增殖并分化為漿細(xì)胞。漿細(xì)胞則可以分泌針對相應(yīng)表位的抗體，這些來自不同 B 細(xì)胞克隆的抗體混合在一起，就形成了多克隆抗體。
 

　　由于抗原通常具有多個不同的表位，所以能夠引發(fā)機體產(chǎn)生針對多個表位的抗體。這些抗體在特異性、親和力等方面存在差異，但共同作用于抗原，可以從不同角度對抗原進行識別和結(jié)合，從而實現(xiàn)對抗原的檢測、定位或中和等功能。

 

　　多抗制備的測定步驟：
 

　　1.抗原準(zhǔn)備：選擇合適的抗原，如純化蛋白、肽段、重組抗原等，確保其純度和免疫原性。
 

　　2.免疫動物：
 

　　-選擇動物：通常選用兔子、山羊等，兔子是多抗制備的，因其體積大，每次可抽取較多血清，且反應(yīng)良好。
 

　　-初次免疫：將抗原與弗氏佐劑等比例混合，充分乳化后，在動物背部多點皮下注射或肌肉注射。
 

　　-加強免疫：初次免疫后間隔一定時間(如2~4周)，用抗原與弗氏佐劑乳化后進行多次加強免疫，以提高抗體效價。
 

　　3.采血與血清分離：
 

　　-采血：在免疫過程中定期采血，檢測抗體效價。采血可在加強免疫后達到預(yù)期效價時進行，可采用頸動脈放血等方式獲取大量抗血清。
 

　　-血清分離：采集的血液在37℃烘箱放置一段時間后，轉(zhuǎn)移到4℃沉淀過夜，離心后收集上清即為血清，也可自然析出血清。
 

　　4.抗體純化：
 

　　-親和純化：如蛋白A/G親和純化可富集免疫球蛋白G(IgG)，除去大量非特異性蛋白，但可能仍有非特異性IgG殘留；抗原特異性親和純化可進一步去除非特異性IgG組分，富集特異性免疫球蛋白。
 

　　-其他純化方法：還可結(jié)合離子交換層析、凝膠過濾層析等方法提高抗體純度。
 

　　5.抗體鑒定：
 

　　-效價測定：常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定抗體效價，即將抗體倍比稀釋后與抗原反應(yīng)，通過檢測吸光值確定效價。
 

　　-特異性檢測：可通過免疫印跡(Western Blot)、免疫組織化學(xué)等方法檢測抗體對目標(biāo)抗原的特異性識別能力。